2.1. Материал и методы исследований
Экспериментально-клинические исследования по изучению пробиотических препаратов ветома 3; 3.1, ветоцила, наринэ, бифитрилака проводили с 1999 по 2008 г. на кафедре фармакологии и общей патологии НГАУ, ЗАО Агрофирма «Лебедевская» и ЗАО птицефабрика «Октябрьская» Новосибирской области в соответствии с открытой инициативной тематикой научно-исследовательских работ, регистрационный номер темы 01.200.1 13903. Исследования проводили на 126 белых мышах и 48 лабораторных крысах, на 1049 цыплятах кроссов ИСА, Бройлер, GV, Смена, Ломанн и Шавер и 47632 курах кросса Родонит (рис. 1). Всего было изучено на лабораторных животных 3 препарата, 12 доз и 5 схем их применения и в условиях производства 4 препарата, 5 доз и 11 схем. Лабораторных животных содержали в виварии кафедры и кормили согласно нормам рационов для лабораторных животных (Батрак Г.Е., Кудрин А.М., 1979). В экспериментах использовали здоровых животных, подобранных по принципу аналогов.
Острую и хроническую токсичность определяли на лабораторных белых мышах и крысах в соответствии с требованиями к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ. Степень токсичности определяли по проценту гибели, общему состоянию, поведенческой активности (гипоактивность), снижению мышечного тонуса (гипотонус), наличию неврологического дефицита (нарушение координации движения, тремор, судороги) и выраженности ушного, корнеального и рефлекса Штраубе. При изучении токсичности также определяли эмбриотоксическое, нефротоксическое, гепатотоксическое и аллергизирующее действие ветома 3. За животными вели систематическое наблюдение, проводили клиническое обследование по общепринятой методике. Патолого-анатомическое исследование животных также проводили по общепринятой методике.
Для определения профилактической эффективности ветома 3 и 3.1, ветоцила, бифитрилака и наринэ учитывали физиологическое состояние, заболеваемость, исход заболевания и сохранность цыплят. При изучении клинико-физиологического состояния цыплят обращали внимание на общее состояние, аппетит, потребление воды, подвижность, оперение, пигментацию ног, наличие побочных нежелательных эффектов.
У подопытных животных изучали гематологические, биохимические и иммунологические показатели крови:
• гематологические: количество эритроцитов, лейкоцитов (меланжерным способом с использованием камеры Горяева), содержание гемоглобина (гемоглобин-цианидным методом); лейкограмму (по Болотникову И.А., 1980);
• биохимические: общий белок, альбумины, α, β, γ-глобулины с помощью автоматического биохимического анализатора на базе лаборатории качества кормов и продуктов животноводства (свидетельство НЦСМС № 464/2005 от 06.06.05 г.);
• иммунологические: цитохимический показатель супероксиддисмутазы полиморфноядерных нейтрофилов, количество дифенсивных белков (ЛКБ) (по Колабской Л.С. и др., 1975), фагоцитарную активность нейтрофилов (по Меньшикову В.В., 1989), фагоцитарный индекс (определяли средним числом фагоцитированных микробов, приходящихся на 1 активный лейкоцит), бактерицидную активность сыворотки крови (по Смирнову П.Н. и др., 1989), лизоцимную активность сыворотки крови
фотоэлектроколориметрическим методом (по Дорофейчику А.Г., 1968), иммуноглобулины A, M, G (по Манчини, 1987).
Для определения состава микрофлоры на 1, 20, 40-е и 1, 15, 30 и 45-е сутки опыта учитывали данные количественного и качественного состава микрофлоры кишечника цыплят (по Знаменскому В.А., 1986). Определяли индекс стабильности микрофлоры (отношение суммарного количества бифидо- и лактобактерий к количественному показателю кишечной палочки). Анатомическую разделку тушек птицы проводили в соответствии с методикой ВНИТИП (2000 г.) на 15, 30 и 45-е сутки эксперимента.
Качество тушек определяли по убойному выходу (отношение живой массы к массе полупотрошеной тушки) и индексу массивности (отношение массы полупотрошеной тушки к длине тушки от последнего шейного позвонка до кончика хвоста, см). Проводили расчет белково-качественного индекса, который является отношением аминокислот триптофана к оксипролину (по Мысик А.Т., 1985).
Для изучения влияние ветома 3 на пищевую ценность мяса определяли: белок (по Кьельдалю), жир (с использованием экстракционного аппарата Сокслета), количество влаги, золу (по ускоренному методу, основанному на применении в качестве катализатора раствора уксусно-кислого магния), аминокислоты, жирные кислоты, микроэлементы (на автоматическом биохимическом анализаторе).
При изучении продуктивности птицы учитывали в динамике абсолютную массу, показатели среднесуточного прироста живой массы и скорости роста животных, количество яиц на одну несушку в первую и вторую фазу яйцекладки. Яичная продуктивность определялась ежедневно, а качественные показатели яиц и масса (путем взвешивания средней пробы) в течение всего периода эксперимента.
Для изучения действия препарата в динамике индивидуально взвешивали цыплят в различные возрастные периоды (в 1-, 7-, 14-, 21-, 28-, 35- и 42-суточном, в 10-, 20-, 30-, 60- и 90-суточном, а также в 1-, 15-, 30-, 45-суточном возрасте).
Цифровые материалы обрабатывали с использованием программы биометрической обработки SNEDECOR V4, Microsoft Excel. Степень и достоверность различий полученных результатов определяли с помощью критериев Стьюдента, Фишера. Применяли методы дисперсионного и корреляционного анализа. Определяли связь между признаками и вычисляли степень влияния на них различных факторов (Сорокин О. Д., 2004).
