2.    МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Диссертационная работа выполнена в 2000-2010 гг. в соответствии с научно-
технической программой кафедры фармакологии и общей патологии ФГОУ ВПО «Но¬
восибирский государственный аграрный университет» по теме: «Разработка научной
концепции применения пробиотиков и биологически активных веществ для повышения
продуктивности, защиты здоровья и лечения животных», номер государственной реги¬
страции 01.200.1 13903.

В процессе выполнения работы проведено шесть научно-производственных опы¬
тов, в которых задействовано 440 цыплят-бройлеров кросса Смена-2, 1300 помесных
мясных гусей краснозерской и китайской пород, 16430 индеек-бройлеров кросса. But-8.

Д ля проведения исследований получено от птиц 972 пробы крови, 104 пробы мяса
Всего в производственных условиях испытано в составе рациона для птиц 3 отдельных
препарата (вег ом 1.1, ветом 13.1, Сел-Плекс) и 2 синбиотика на их основе, 11 схем при¬
менения. Общая схема исследований представлена на рис 1.

Препараты после ступенчатого предварительного смешивания с концентратами в
смесителе малой емкости раздавали вручную. Отбор проб кормов для зоотехнического
анализа проводили согласно ГОСТ - 13496.0-80.

Ветом 1.1 является иммоболизировашой высушенной споровой биомассой бак¬
терий Bacillus subtilis, их гамм ВКПМ - 7092, продуцирующих интерферон. Ветом 13.1
является иммоболизировашюй высушенной споровой биомассой бактерий Bacillus li-
cheniformis IC 831-1-2. Сел-Плекс получен микробиологическим методом, содержит
селен преимущественно в составе аминокислот селенометаонина (50%) и селеноцисти-
на (25%). Общее содержание селена 1000 мг/кг.

В течение всего периода выращивания определяли клинико-физиологическое со¬
стояние птицы путем ежедневного ее осмотра. При этом обращали внимание на общее
поведение, аппетит, потребление воды, подвижность, пигментацию ног, оперение.

Определение концентрации селена в пробах мышечной ткани, корма и воды про¬
водили в лаборатории микропримесей Томского политехнического университета ин-
версионно-волыамперометрическим методом измерения массовой концентрации селе¬
на

Научно-производственные опыты на цыплятах-бройлерах кросса Смена-2 были
проведены в племптицссовхозе «Колмогоровский» Яшкинскою района, помесных мяс¬
ных гусях краснозерской и китайской пород - на гусиной ферме ЗАО «Провинция» (с.
Колычеве) Промышленновскош района и ш щейках-бройлерах кросса But-8 - в Ясно¬
горском филиале ООО ПФ «Сибирская губерния» агрохолдинга «АЛПИ» Кемеровско¬
го района, Кемеровской области. При этом определяли морфологические и биохимиче¬
ские показатели крови, некоторые показатели неспецифического иммунитета, кислот¬
но-щелочного состояния, процессов свободнорадикального окисления и антиоксидант¬
ной защиты организма Изучали влияние препаратов на интенсивность роста, показате¬
ли мясной продуктивности, химический состав мышечной ткани и содержание в ней
селена

Исследования на цыплятах-бройлерах включали серию опытов в двукратной по¬
вторности (2000 - 2002 гг.). В ходе работы на первом этапе определяли оптимальную
схему применения пробиотика ветом 1.1 в составе рациона

,

Рис. Г. Общая схема исследований

Дня изучения влияния ветома 1.1 по принципу аналогов сформировали три опыт¬
ных и одну кошрольн)то труппы суточных цыплят-бройлсров кросса Смена-2 по 55 го¬
лов в каяодой. Птице опытных групп ветом 1.1 назначали с кормом в дозе 75 мг на 1
кг массы с использованием трех схем (табл. 1).

Период выращивания цыпляг-бройлеров разделяли на 2 этапа (согласно принятой
технологии с использованием беспересадочных птичников): первый - в возрасте 1-4 не¬
дели, второй - старше 4 недель. За цыплятами опытных и контрольных групп наблюда¬
ли в течение 60 дней.

Условия содержания и ухода для всех групп птицы были одинаковыми. Цыплят
содержали в типовом птичнике на глубокой подстилке. Плотность посадки на 1 м² пола
составляла 18 цыплят; фронт кормления - 2,5 см/tm, фронт поения -1 см/гол., что со¬
ответствует нормам ВНИТИП. В ходе эксперимента цыплята-бройлеры получали кор¬
ма одинакового суточного рациона, сбалансировашюго по основным питательным ве¬
ществам, макро- и микроэлементам.

Научно-производственные опыты по изучению пробиотиков ветом 1.1, ветом 13.1,
препарата Сея-Плекс (органическая форма селена) и синбиотиков на их основе на фи¬
зиологические показатели помесных мясных гусей краснозерской и китайской пород
проведены в 2007 г. Схема опыта приведена в табл. 2,

Для проведения научнснхозяйственного опыта из 30-сугочных гусят по принципу
аналогов были сформированы контрольная и 5 опытных групп по 50 голов в каждой -
25 самцов и 25 самок. Гусятам из контрольной группы препараты не назначали. Птицу
содержали в идентичных условиях в помещении фермы, в отдельной клетке для каждой
группы, предоставляли ежедневный моцион в вольерах, сообщающихся с клетками. В
ходе опыта гуси получали корма одинакового суточного рациона, сбалансированного
по основным питательным веществам, макро- и микроэлементам.

В опыте на ицдейках-бронлерах кросса But-8 с последующей производственной
проверкой изучали влияние пробиотика ветом 1.1, препарата Сея-Плеюс и синбиотика
на их основе.

Для проведения опыта по методу аналогов были сформированы одна кон¬
трольная и три опытные группы суточных индюшат по 30 голов в каждой - 15
самцов и 15 самок. Схема опыта на индейках приведена в табл. 3.

По итогам производственной проверки с учетом стоимости израсходованных
препаратов и. дополнительно произведенной продукции определяли экономическую
эффективность синбиотиков на основе пробиотиков ведома 1.1, ветома 13.1 и препарата
Сел-Плекс при выращивании индеек и помесных мясных гусей. Условия содержа1лгя и
ухода да всех групп птицы были одинаковыми: в типовом птичнике на глубокой под¬
стилке. Нормы кормления пгацы устанавливали с учетом фазы выращивания. С целью
изучения показателей роста и сохранности определяли абсолютный прирост живой
массы за период выращивания, количество павших птиц.

Индейки опытного птичника в количестве 8100 голов (из них 3959 индюшек и 4141
индюк) получали основной рацион с вегомом 1.1 в дозе 75 мг на 1 кг массы + 0,3 мг се¬
лена в форме Ссл-Плекса на 1 кг корма 1 раз в сутки в течение 10 суток, повторный
цикл через 20 суток.

Срок выращивания индюшек составил 103 суток, ивдюков -124, гусей -120 суток.
Реализационная цена 1 кг продукции в живой массе на момент окончания опыта (ин¬
дейки) равнялась 83,8 и 78,50 руб. (гуси). Стоимость 1 кг Сел-Плекса-570 руб., 1 кг ве¬
тома 1.1-938 и 1 кг ветома 13.1 -938 руб.

Гуси кошрольной группы в количестве 500 голов получали основной рацион без
включения в него испытуемых препаратов. При этом гусям опытной группы в количе¬
стве 500 голов включали в состав основного рациона ветом 13.1 в дозе 75 мг на 1 кг
массы + 0,3 мг селена в форме Сел-Плекса на 1 кг корма 1 раз в сутки в течение 10 суток
с повторным циклом через 20 суток.

Морфологические, биохимические и иммунологические исследования крови про¬
водили в лаборатории областной клинической болышцы № 1 города Кемерово и в Ке¬
меровской межобластной ветеринарной лаборатории по болезням птиц.

Кровь для исследований у цыплят брали в первые сутки жизни и затем на 20-, 40- и
60-е сутки, у индюшат в 1-, 50- и 100-е сутки жизни, непосредственно из сердца по ме¬
тодике Б.А. Шестеркипа (1972) или из крыловой вены. У гусей на 30-е сутки жизни, а
затем на 75-е и 120-е сутки пробы крови получали из подкожной вены голени. Во всех
случаях кровь брали утром, до кормления, для биохимических исследований - без кон¬
серванта, для морфологических - с использованием гепарина или трилона Б.

Морфологические показатели крови определяли общепринятыми методами: коли¬
чество эритроцитов - на ФЭК КФК-3 цефалометрическим методом; гемоглобин - на
ФЭК КФК-3 гемоглобшгциани дным методом; скорость оседания эритроцитов - микро-
методом ГТанченкова; лейкоциты - в камере Горяева; лейкограмму - по методу ИА Бо¬
лотникова (1980); гематокрит- методом центрифугирования.

Биохимические исследования крови включали определение: общего белка - биуре-
товым методом; белковых фракций - электрофорезом на ацетатцеллюлозе; общего
кальция - колориметрическим методом по Г.Ф. Коромыслову и ЛАКудрявцевой (Кон-
драхип И.П., 2004); неорганического фосфора - в безбелновом фильтрате крови с вана-
дат-молибдашым реактивом в модификации Г.Ф. Коромыслова и ЛА Кудрявцевой
(Кондрахин ИЛ, 2004); глюкозы - гетокозооксидазным методом; лактата, калия и на¬
трия - на ионоселективном анализаторе Easy Lyte фирмы MEDICA (США); резервной
щелочности крови - на анализаторе Easy Blood Gas той же фирмы по рекомендациям
производителей.

Для характеристики процессов свободнорадикального окисления и антиоксидант¬
ной защиты определяли атгоюксидаштгую общую активность плазмы крови (АОА) по
методу Л.И. Андреевой др. (1988); количество гидроперекисей липидов (ГПЛ) - спек-
трофотометричсски при длине волны 232 нм.

Иммунологические исследования включали определение:    количества Т-

лимфонитов, В-лимфоцитов - методом спонтанного розеткообразования с эритроцита¬
ми барана; лизоцимной активности сыворотки крови (ЛАСК) - по отношению к лизи¬
рующему микрококку Micrococcus Jysodeicticus по И.Ф. Храбусговскому и др. (1979);
бактерицидной активности сыворотки крови (БАСК) - по отношению к кишечной паг
почке по Мишелю и Трефферу (1956) в мод ификации Ю.М. Маркова и др. (1974).

С целью изучения показателей роста подопытных птиц каждой группы подвергали
индивидуальному взвешиванию: цыплят - при формировании групп и в дальнейшем
раз в 10 дней, гусят - при формировании групп и далее в возрасте 62,94 и 131 суток, ин¬
дюшат- при формировании групп и далее в возрасте 45,80,103и 124 суток. По резуль¬
татам рассчитывали среднесуточный, абсолютный и относительный (по С. Броди) при¬
росты живой массы но группам в целом, а у гусят и индюшат ещё и отдельно для сам¬
цов и самок внутри каждой группы.

Контрольный убой подопытных птиц проводили в соответствии с ГОСТ 18292-85,
категории тушек определяли согласно ГОСТ 25391-82. Для определения убойных ка¬
честв тушек подопьгпюй птицы брали по 3 самца и 3 самки из каждой группы по мето¬
дике Т.В. Поливановой (1967). При этом учитывали массу; предубойную, непсггроше-
ной, полупотрошеной, потрошеной тушки, внутренних органов (сердце, печень, мы¬
шечный желудок).

Качество мяса оценивали органолептически и химическими методами. Органолеп¬
тически определяли следующие показатели: аромат, вкус, нежность и сочность варено¬
го мяса; аромат, вкус, прозрачность и крепость бульона. Результаты органолептической
оценит мяса и бульона отражали в баллах в дегустационных листах.

Химический анализ мышечной ткани проводили общепринятыми методами в лабо¬
ратории биохимии Сибирского научно-исследовательского института животноводства
СО Россельхозакадемии. Количество влага определяли высушиванием при температуре
105 ±2°С и 150 ±2°С, содержание азота по-Кьеяьдалю, сырого жира-с использовани¬
ем экстракционного аппарата Сокслета, золы - гравитометрическим методом; кальция,
калия и натрия - методом пламенной фотометрии; фосфора - ванадомолибдалным ме¬
тодом, микроэлементов- методом атомной абсорбции на спектрофотометре «Перкин-
Эльмер» по ГОСТ 27996-88, аминокислот- на анализаторе ААА-339М.

Экономическую эффективность выращивания подопытной типы при использова¬
нии пробиотиков ветом 1.1, вегом 13.1, препарата Сел-Ппекс и их сочетаний в ценах
2001 и 2008 гг. рассчитывали по методике Г.М. Лоза и др. (1980).

Все данные, полученные в ходе эксперимента, обрабатывали биометрически с ис¬
пользованием стандартных компьютерных программ. Достоверность полученных ре¬
зультатов определяли с помощью критерия Стьюдента. Расчеты проведены по алгорит¬
мам, изложенным в соответствующих руководствах (Плохинский Н.А., 1961; Меркурь¬
ева Е.К, 1970; Зайцев Г.Н, 1973).

Отдельные этапы работы выполнены совместно с доктором сельскохозяйственных
наук, профессором С А Шевченко, директором НПФ «Исследовательский центр» АИ.
Леляком, кандидатом сельскохозяйственных наук А.И. Днгановым, кандидатом биол
гнческих наук О.В. Смоловской при технической помощи сотрудников кафедры фар
макологии и общей патологии ФГОУ ВПО «Новосибирский государственный аграр
ный университет».